Diseño de una técnica de amplificación isotérmica mediada por horquillas (LAMP) en el gen AMA-1 para la detección de Plasmodium vivax

Abstract

El diagnostico rápido y preciso de la malaria es fundamental en el tratamiento y su control de la enfermedad. Las pruebas diagnósticas basadas en la identificación del parásito mediante microscopía óptica no pueden detectar de manera confiable las infecciones de baja densidad parasitaria y los métodos moleculares si bien son muy sensibles se mantienen demasiado complejos para su implementación en campo. Por ello, la técnica LAMP (de las siglas en inglés: Loop Mediated Isothermal Amplification) es una de las técnicas moleculares más utilizadas en el diagnóstico de enfermedades infecciosas gracias a su capacidad isotérmica, alta sensibilidad, preparación de reactivos simple y fácil lectura de resultados. El presente trabajo de investigación tuvo como finalidad el optimizar un método detección rápida, específica y sensible de Plasmodium vivax mediante la técnica de amplificación isotérmica mediada por horquillas para lo cual se diseñaron cebadores que amplifiquen una secuencia especifica del gen ama -1 de Plasmodium vivax. Para ello, se clonó el producto de amplificación para la obtención de ADN plasmídico el cual fue usado como control estándar de amplificación en los ensayos de optimización de las condiciones de amplificación y la determinación del límite de detección de la técnica. La especificidad de la técnica se realizó con muestras de ADN causantes de malaria en humanos - Plasmodium falciparum, P. malariae y P. ovale-. Finalmente, se realizó la evaluación de muestras previamente diagnosticadas por el método de rutina y técnicas moleculares para P. vivax en donde se comprobó la efectividad del ensayo. Los resultados obtenidos confirmaron que la técnica LAMP tiene como límite de detección 4 parásitos/μL en el cual se obtuvieron resultados fácilmente interpretables en una hora de incubación. Gracias a estas características, esta técnica podría ser implementada en zonas endémicas rurales donde hay diferentes factores que limitan la implementación de equipos sofisticados para un diagnóstico rápido y sensible de la malaria.